產(chǎn)品信息

本產(chǎn)品采用層析式雙抗體夾心法同時(shí)檢測(cè)目的基因CRISPR酶切產(chǎn)物和LAMP、RAA或RPA，PCR擴(kuò)增產(chǎn)物。當(dāng)CRISPR信號(hào)探針（A）擴(kuò)增產(chǎn)物（B）和做如下修飾時(shí)，即可使用本產(chǎn)品進(jìn)行檢測(cè)——CRISPR信號(hào)探針（A）的一端修飾有生物素（Biotin），另一端修飾有異硫氰酸熒光素（FITC）或6-羧基熒光素（6-FAM）；擴(kuò)增產(chǎn)物（B）一端修飾有地高辛（Dig），另一端修飾有羅丹明（TAMRA）。

預(yù)期用途:

CRISPR單酶切產(chǎn)物和擴(kuò)增產(chǎn)物的同時(shí)檢測(cè)。

包裝規(guī)格/貨號(hào):

圖1. 單靶標(biāo)HybriDetect側(cè)向?qū)游鲈嚰垪l（彩虹型）結(jié)構(gòu)示意圖

儲(chǔ)存條件及有效期:

儲(chǔ)存條件：存放于避光干燥處，儲(chǔ)存溫度4~30℃。

有效期：12個(gè)月。

操作步驟:

1.??根據(jù)檢測(cè)樣品數(shù)量取出相應(yīng)數(shù)量的試紙條，并在吸收墊（圖1）上做好標(biāo)記。每根試紙條只能用于單次、2種不同產(chǎn)物的檢測(cè)。CRISPR單酶切產(chǎn)物體積為50~100μL時(shí)，可直接在200μL PCR反應(yīng)管中檢測(cè)核酸產(chǎn)物，產(chǎn)物體積不足50μL時(shí)，需在PCR管內(nèi)加超純水補(bǔ)足體積至50μL，吸打混勻后，才能用于檢測(cè)

2.???LAMP，RAA/RPA，PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的CRISPR酶切反應(yīng)結(jié)束后，打開PCR反應(yīng)管，將試紙條結(jié)合墊端（箭頭端）插入PCR反應(yīng)管（圖1），液面不得超過結(jié)合墊最上端，待判讀區(qū)全部浸潤（約需1～2min，外界環(huán)境溫度較低時(shí)，如冬季，會(huì)降低吸水速度，判讀區(qū)浸潤時(shí)間將會(huì)延長），待檢測(cè)線（T線）顯色后，可以將試紙條拿出。根據(jù)試紙條顯色情況直接讀取檢測(cè)結(jié)果。

3.??質(zhì)控線（C線）顯色后10min內(nèi)觀察結(jié)果，10min后判讀無效。

4.??記錄檢測(cè)結(jié)果，將試紙條密封丟棄在安全處。

圖2. CRISPR單酶切及擴(kuò)增產(chǎn)物檢測(cè)試紙條結(jié)果判讀示意

1.???陽性（+）：

試紙條質(zhì)控線（C線）和2條檢測(cè)線（T線）均出現(xiàn)條帶，其中T1為紅色，T2為藍(lán)色，C線為紅色；試紙條質(zhì)控線（C線）不顯色，T1為紅色，T2為藍(lán)色時(shí)，說明CRISPR體系可進(jìn)行有效酶切，并激活報(bào)告基團(tuán)顯色，相應(yīng)的靶基因均可判定為陽性。

試紙條質(zhì)控線（C線）和其中1條檢測(cè)線（T線）出現(xiàn)條帶，其中T1為紅色，C線為紅色，或僅有T1為紅色時(shí)，說明明CRISPR體系可進(jìn)行有效酶切，并激活報(bào)告基團(tuán)顯色，相應(yīng)靶基因可判定為陽性；T2為藍(lán)色，C線為紅色時(shí)，說明帶有Dig和羅丹明標(biāo)記的目的基因擴(kuò)增產(chǎn)物可判定為陽性。

2.???陰性（-）：

試紙條質(zhì)控線（C線）為紅色條帶，檢測(cè)線（T線）不顯色，判定為陰性結(jié)果。

3.無效：

試紙條質(zhì)控線（C線）和檢測(cè)線（T線）均未出現(xiàn)條帶，提示所用的試紙條或擴(kuò)增試劑可能已經(jīng)損壞、失效或操作有誤。此時(shí)，應(yīng)仔細(xì)閱讀說明書，重新擴(kuò)增和檢測(cè)。如果問題仍然存在，應(yīng)立即停止使用同一批號(hào)的產(chǎn)品，并與當(dāng)?shù)毓?yīng)商聯(lián)系。

注意事項(xiàng)及安全提示:

1.??本產(chǎn)品應(yīng)結(jié)合探針使用，如探針合成純度不足，探針含游離的Biotin或者游離的FITC時(shí)，會(huì)導(dǎo)致以超純水為陰性對(duì)照的切割產(chǎn)物T線呈現(xiàn)紅色，即陰性對(duì)照呈現(xiàn)假陽性結(jié)果。

2.??本產(chǎn)品可用于探針合成質(zhì)量的檢測(cè)。調(diào)整空白陰性對(duì)照中探針的使用濃度至400 nM，并進(jìn)行切割反應(yīng)。當(dāng)試紙條結(jié)合墊端浸入Cas12/Cas13切割產(chǎn)物后的5~7 min內(nèi)，試紙條T線顯紅色，即說明探針純度難以滿足實(shí)驗(yàn)要求，會(huì)因探針純度不足導(dǎo)致假陽性結(jié)果。建議更換探針合成供應(yīng)商，并重新合成探針。本產(chǎn)品在探針使用濃度為20~50nM的情況下，試紙條結(jié)合墊端浸入Cas12/Cas13切割產(chǎn)物后的30 min內(nèi)，T線均不會(huì)顯色。

3.??本產(chǎn)品僅供科研使用。使用前請(qǐng)仔細(xì)閱讀說明書，嚴(yán)格按照說明書操作。違反或者未按說明書進(jìn)行操作可能導(dǎo)致錯(cuò)誤結(jié)果。

4.???產(chǎn)品應(yīng)依照說明書要求，儲(chǔ)存于合適的環(huán)境和溫度下，并在有效期內(nèi)使用。儲(chǔ)存不當(dāng)或產(chǎn)品過期可能導(dǎo)致錯(cuò)誤結(jié)果。打開包裝后請(qǐng)盡快使用試紙條，以免因試紙條受潮影響試驗(yàn)結(jié)果。檢測(cè)環(huán)境光線不足，操作者色弱等因素均可能導(dǎo)致錯(cuò)誤結(jié)果。

5.???使用完畢后，應(yīng)盡快將紙條裝進(jìn)密封袋，妥善處理。本產(chǎn)品為一次性使用產(chǎn)品，僅限科研，請(qǐng)勿重復(fù)使用。

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