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DNA恒溫快速擴增試劑盒（膠體金試紙條型）

貨號	WLN8203KIT	售價（元）	2400
規(guī)格	48T（50ul）	CAS號

產品簡介
相關產品

DNA恒溫快速擴增試劑盒（膠體金試紙條型）使用說明書

（貨號：WLN8203KIT）

原理概述：

本試劑盒基于一種常溫恒溫核酸快速擴增技術：在常溫恒溫下，重組酶和引物形成蛋白/單鏈核苷酸的復合體Rec/ssDNA，在輔助蛋白和單鏈結合蛋白SSB的幫助下，侵入雙鏈DNA模板；在侵入位點形成D-loop區(qū)域，并開始對DNA雙鏈進行掃描；待找到與引物互補的目的區(qū)域后，復合體Rec/ssDNA解體的同時，聚合酶也結合到引物的3’末端，開始鏈的延伸。依賴nfo酶的作用，加入根據模版設計的特異的分子探針，使用膠體金技術（三明治夾心法）可以對最終結果進行檢測。

產品特點：

本試劑盒具有靈敏度高、特異性強、反應時間短（僅需12 mins）等優(yōu)點，反應組分為干粉狀態(tài)，操作簡便，易于保存。

本試劑對設備要求低，金屬浴、水浴鍋等即可進行反應操作，無需購買PCR擴增儀等價格高昂的專屬設備。

引物設計：

建議使用長度在 30-35 bp的引物，引物過短會影響擴增速度和檢測靈敏度；下游引物的5’端標記一個修飾基團（常用生物素）。引物設計避免形成二級結構而影響擴增；擴增子長度建議在150-300 bp，通常不超過500 bp。

熒光探針設計：

在上下游引物中間，設計一段長度為46-52nt與目的片段互補的序列；5’端修飾一個抗原標記（典型FAM）; 在5’端和3’末端的中部位置標記一個dSpacer（四氫呋喃，THF），作為nfo的識別位點；3’末端標記一個修飾基團，例如胺基、磷酸基團或C3-Spacer等。

試劑盒組成：

組成	含量
A buffer	1.6 mL×1管
B buffer	150 μL×1管
試劑	48份
使用說明書	1份

試劑盒儲存：

運輸條件：低溫運輸；

儲存條件：儲存溫度 ≤ -20 oC，避光保存，避免重壓和反復凍融；

產品有效期：14個月。

操作步驟：提前30分鐘將試劑盒所需組分取出，室溫融化，震蕩混勻。

1) 每個干粉反應管加入29.4 μL A buffer（注意：A buffer需完全融化混勻，否則會對實驗效果產生影響）；

2) 每個反應管分別加入2 μL上游引物、2 μL下游引物和0.6 μL探針（引物和探針濃度為10 μM，對于多個反應、步驟1和步驟2可以混合后再分裝至反應管中）；

3) 向反應管中依次加入11.5 μL ddH₂O和2 μL核酸模板（可根據核酸濃度調整加入的核酸模板體積，并相應調整加入的ddH₂O體積，至模板與ddH₂O總體積為13.5 μL）；

4) 最后向反應管中加入2.5 μL B buffer并充分混合（請務必上下顛倒甩動反應管8-10次進行混勻；對于多個反應，建議將B buffer加至反應管的蓋子內側上下顛倒后混勻）；

5) 混勻后，將反應液甩（或快速離心）至管子底部，然后立即將反應管放入恒溫設備中37-39 oC孵育8-12 mins；

6) 反應結束后，取10 μL加入含有190 μL ddH₂O的離心管中，混合均勻后，將膠體金試紙條的樣品端插入離心管中平衡，5 mins內觀察質控線與檢測線判讀結果。

體系配制

組分

體積（μL）

A buffer

29.4

上游引物(10 μM)

2

下游引物(10 μM)

2

探針(10 μM)

0.6

ddH₂O和核酸模板

13.5

B buffer

2.5

總體積

50

注意事項：

1．由于試劑盒靈敏度非常高，在進行反應時請注意避免核酸污染，并設置空白對照；

2．使用時，請取出實驗所需的MIRA反應單元的數量，剩余部分請置于存儲條件下。

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產品名稱	貨號	規(guī)格	目錄價格
DNA恒溫快速擴增試劑盒（基礎型）	WLB8201KIT	48份/盒	2400
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RNA恒溫快速擴增試劑盒（基礎型）-II	WLRB8207KIT	48份/盒	2500
RNA恒溫快速擴增試劑盒（熒光型）-II	WLRE8208KIT	48份/盒	2500
HybriDetect試紙條	WLFS8201	50條/包	1650

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組分	體積（μL）
A buffer	29.4
上游引物(10 μM)	2
下游引物(10 μM)	2
探針(10 μM)	0.6
ddH₂O和核酸模板	13.5
B buffer	2.5
總體積	50