產(chǎn)品簡介：

伊文思藍(lán)（Evans Blue，CAS NO：314-13-6），也稱作埃文斯藍(lán)，是一種非膜滲透性的染料。當(dāng)質(zhì)膜受損，染料能進(jìn)入細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核，從而將其染成藍(lán)色，可用來檢測細(xì)胞活力。伊文思藍(lán)還能用來研究血腦屏障（BBB）滲透性，通過與白蛋白結(jié)合從而指示血腦屏障穿透蛋白能力。

本品為0.5%的伊文思藍(lán)染色液，使用很方便，直接加入樣本染色即可。

產(chǎn)品性質(zhì)

CAS NO：314-13-6

化學(xué)名：6,6′-[(3,3′-Dimethyl[1,1′-biphenyl]-4,4′-diyl)bis(2,1-diazenediyl)]bis[4-amino-5-hydroxy-1,3- naphthalenedisulfonic acid] tetrasodium salt

同義名：Evans Blue tetrasodium salt伊文思藍(lán)（埃文斯藍(lán)）四鈉鹽；Direct blue 53直接藍(lán)53；CI 23860；

分子式：C34H24N6Na4O14S4

分子量：960.82g/mol

使用方法

一、血腦屏障通透性

1.1 取處理后的動物（以小鼠為例），靜脈注射伊文思藍(lán)染色液（0.5%），使得小鼠眼睛、皮膚出現(xiàn)藍(lán)色。0.5～1h 后處死小鼠，取出目的腦組織?！咀⒁狻浚阂廖乃妓{(lán)染色液的注射用量需要根據(jù)動物類型以及體重來決定。

1.2將腦組織置于 1.5ml 離心管中，加入 1ml PBS，迅速用組織勻漿器將腦組織制成勻漿，4℃離心。

1.3取上清，加入等量三氯乙酸，4℃孵育。該步驟亦可采用如下操作：取上清，按上清：丙酮=3:7比例加入丙酮，室溫孵育24h。

1.4 4℃離心15min。

1.5 取上述溶液，用分光光度計測 620 nm下的OD值。同時測定已知不同梯度的標(biāo)準(zhǔn)伊文思藍(lán)的OD值，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算出待測樣品的伊文思藍(lán)含量。

二、細(xì)胞活力鑒定

2.1 取 100μl 重懸細(xì)胞到常規(guī)離心管內(nèi)，加入100μl 伊文思藍(lán)染色液（0.5%）輕輕混勻(染色時間可適當(dāng)延長，但不宜超過 10min)。

2.2吸取少量經(jīng)過染色后的細(xì)胞，用血細(xì)胞計數(shù)板計數(shù)。通常如果要比較精確地進(jìn)行定量，每個細(xì)胞樣品至少數(shù)500個細(xì)胞，數(shù)出藍(lán)色細(xì)胞和細(xì)胞總數(shù)。

細(xì)胞存活率計算公式如下： 細(xì)胞存活率＝（細(xì)胞總數(shù)－藍(lán)色細(xì)胞數(shù)）/細(xì)胞總數(shù)×100%

注意事項

1）  伊文思藍(lán)對人體有輕微毒性，操作過程中請注意防護(hù)。

2）  為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

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