產(chǎn)品信息：

產(chǎn)品簡介

Human DiI-High Density Lipoprotein為熒光探針DiI（1,1-dioctadecyl-3,3,3,3- tetramethyl-indocarbocyanine perchlorate）標(biāo)記的高密度脂蛋白，可以用來觀察培養(yǎng)細(xì)胞的HDL結(jié)合位點(diǎn)，或篩選HDL受體表達(dá)缺陷型細(xì)胞突變株。也可以通過流式細(xì)胞術(shù)評估細(xì)胞受體水平，或檢測組織內(nèi)的受體水平。

沃博生物提供的Human DiI-HDL為無菌包裝，可以直接稀釋使用。除提供DiI-HDL，我們還提供不帶標(biāo)記的HDL，I125標(biāo)記的HDL。

制備與使用方法

純化的人健康血漿來源的HDL直接標(biāo)記上DiI熒光探針，然后通過超速離心以及透析的方法純化回收標(biāo)記產(chǎn)物，并濾膜過濾除菌。純化的DiI-HDL溶于含0.02 mM EDTA的PBS，pH 7.4中。

操作步驟

a）無菌條件下，將DiI-HDL用細(xì)胞培養(yǎng)基稀釋至10-30 μg/ml。

b）加入活細(xì)胞內(nèi)，37℃培養(yǎng)4-5小時。

c）孵育結(jié)束，吸去含有Human DiI-HDL的培養(yǎng)基，并用無探針的培養(yǎng)基洗幾次。

d）根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求用熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀檢測。

1) 熒光顯微鏡觀察

采用標(biāo)準(zhǔn)的羅丹明激發(fā)：發(fā)射濾光片（或建議使用波長為：Ex/Em=549nm/565nm）；若需要請使用含3%甲醛的PBS進(jìn)行固定，切勿使用甲醇或丙酮固定，因DiI易溶于有機(jī)溶劑?！咀ⅰ浚盒柙O(shè)陽性細(xì)胞以做對照。

2) 細(xì)胞分選（流式細(xì)胞術(shù)）

胰蛋白酶處理細(xì)胞或者加入EDTA制成單細(xì)胞懸液，選用合適的已標(biāo)記純化細(xì)胞用作陰性和陽性對照，從而進(jìn)行流式分選設(shè)門（gate）。（建議使用波長為Ex: 514/549nm; Em: 565nm）。

產(chǎn)品屬性

濃度：0.8-3.0 mg/ml

外觀：乳狀液體

吸光度比例：DiI/Protein=555nm/275nm=1.4

緩沖液組分：0.02 mM EDTA in PBS, pH 7.4

運(yùn)輸與保存方法：冰袋運(yùn)輸；4oC無菌避光，收到貨后可穩(wěn)定保存6周。千萬不可凍存！

注意事項(xiàng)

1）本品的稀釋工作液極不穩(wěn)定，建議即配即用；使用時一定要無菌操作！

2）長期貯存可能會有沉淀析出，屬于正?，F(xiàn)象，低速離心2 min去除沉淀即可使用；

3）為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

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