急性呼吸道感染是兒童常見的呼吸道疾病，通常由病毒引起。呼吸道合胞病毒（RSV）和呼吸道腺病毒（ADV）是引起兒童急性呼吸道感染的兩種常見病原體。輕度者可引起常見的感冒癥狀，如咳嗽和流鼻涕，而嚴(yán)重者可出現(xiàn)嚴(yán)重的并發(fā)癥，如肺炎和中耳炎。根據(jù)世界衛(wèi)生組織的建議，病原體的檢測需要具備快速、準(zhǔn)確、敏感、特異性的特點(diǎn)，不應(yīng)依賴專門的技術(shù)人員或大型儀器。因此，開發(fā)一種能夠滿足上述檢測要求的RSV和ADV的檢測方法尤為重要。深圳兒童醫(yī)院兒科研究所的馬東禮主任課題組在《Scientific Reports》期刊上發(fā)表文章《A multiplex recombinase polymerase amplification assay combined with CRISPR/ Cas12a for the detection of respiratory syncytial virus and respiratory adenovirus》，影響因子4.6。
研究概述
將多酶恒溫快速核酸擴(kuò)增技術(shù)MIRA與CRISPR/Cas檢測系統(tǒng)相結(jié)合。通過設(shè)計(jì)MIRA引物和CRISPR rna（crRNAs），多序列比較，優(yōu)化反應(yīng)條件，并使用熒光數(shù)值檢測裝置，驗(yàn)證靈敏度和特異性。并且以qPCR結(jié)果作為比較對照，研究了160例臨床咽拭子樣本的檢測結(jié)果的一致性。
（MIRA-CRISPR/Cas12a檢測法檢測步驟示意圖）
實(shí)驗(yàn)結(jié)果
1.MIRA-CRISPR/Cas12a檢測方法靈敏度和特異性
在MIRA方法檢測中，使用RSV-F1/R1引物對從RSV、ADV、PIV、RhV、MP、CP、FluB、hMPV、FluA或RSV/ADV合并感染患者的咽拭子樣本中擴(kuò)增核酸。除RSV和ADV有擴(kuò)增條帶，其他結(jié)果均為陰性，說明所選MIRA引物與檢測的其他8種病原體未發(fā)生交叉反應(yīng)，且保守性良好。隨后，使用無菌水對RSV和ADV重組質(zhì)粒進(jìn)行10倍梯度稀釋，對RSV和ADV的檢測限均為106copies/mL。
（1-10：分別為RSV、RSV/ADV合并感染患者咽拭子樣本以及其他呼吸道病原體樣本）
（1-6：107至102稀釋質(zhì)粒DNA；7：陰性對照）
2.與qPCR做對比
與qPCR方法相比，RSV和ADV的檢出限均為103copies/mL。
（qPCR檢測RSV和ADV的靈敏度）
MIRA-CRISPR方法更適合基層實(shí)驗(yàn)室，檢測時(shí)間短，操作簡單，無需大型qPCR儀器即可完成實(shí)驗(yàn)操作。
3.臨床樣本對比
從急性呼吸道感染的兒童中采集咽拭子樣本160例。同時(shí)使用MIRA-CRISPR方法、qPCR方法進(jìn)行檢測，并將結(jié)果與臨床試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行比較。與qPCR方法相比，MIRA-CRISPR方法對RSV和ADV的敏感性分別為98.1%和91.4%，檢測特異性均為100%。Kappa值大于0.95，表明其一致性程度較高。
MIRA-CRISPR方法對RSV和ADV的檢測具備快速、靈敏、特異性強(qiáng)的優(yōu)勢。它能及時(shí)準(zhǔn)確地檢測到病毒感染，更加適合于醫(yī)療資源匱乏的地區(qū)使用。
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安普未來生物介紹
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安普未來多酶恒溫快速核酸擴(kuò)增技術(shù)MIRA技術(shù)在恒溫39°C-42°C下核酸擴(kuò)增，反應(yīng)時(shí)間僅為5-20 min。此外，不需要嚴(yán)格的實(shí)驗(yàn)室條件，應(yīng)用場景多元化：綜合醫(yī)院檢驗(yàn)科、基層醫(yī)療、居家檢測、田間地頭等。
試劑產(chǎn)品形態(tài)多樣化：凍干粉、凍干微球等；顯示結(jié)果的多樣性：凝膠電泳、熒光曲線、膠體金試紙條等。試劑性能穩(wěn)定、便于操作、方便存儲運(yùn)輸。
并且安普未來生物以MIRA為核心平臺技術(shù)研發(fā)出“超快速核酸釋放技術(shù)”、“雙通道恒溫?zé)晒鈾z測儀”、“自測型核酸檢測裝置”等一系列配套產(chǎn)品，打造快速分子檢測整體解決方案。
RPA試劑盒及試紙條系列：
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貨號 |
產(chǎn)品 |
規(guī)格 |
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JY0209 |
雙靶標(biāo)HybriDetect側(cè)向?qū)游鲈嚰垪l（彩虹型） |
50T |
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JY0201 |
單靶標(biāo)HybriDetect側(cè)向?qū)游鲈嚰垪l（彩虹型） |
50T |
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JY0307 |
Tiosbio? CRISPR單酶切及擴(kuò)增產(chǎn)物檢測試紙條 |
50T |
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JY0301 |
CRISPR Cas12/13 HybriDetect試紙條 |
50T |
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JY0308 |
Tiosbio? CRISPR雙酶切檢測試紙條（變色龍） |
50T |
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WLB8201KIT |
DNA恒溫快速擴(kuò)增試劑盒（基礎(chǔ)型） |
48T |
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WLE8202KIT |
DNA恒溫快速擴(kuò)增試劑盒（熒光型） |
48T |
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WLN8203KIT |
DNA恒溫快速擴(kuò)增試劑盒（膠體金試紙條型） |
48T |
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WLRB8204KIT |
RNA恒溫快速擴(kuò)增試劑盒（基礎(chǔ)型） |
48T |
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WLRE8205KIT |
RNA恒溫快速擴(kuò)增試劑盒（熒光型） |
48T |
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WLRN8206KIT |
RNA恒溫快速擴(kuò)增試劑盒（膠體金試紙條型） |
48T |
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WLB5001 |
DNA恒溫快速擴(kuò)增試劑盒（液體基礎(chǔ)型） |
100T |
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WLN5002 |
DNA恒溫快速擴(kuò)增試劑盒（液體膠體金型） |
100T |
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WLR5003 |
DNA恒溫快速擴(kuò)增試劑盒（液體熒光型） |
100T |
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WLRB5001 |
RNA恒溫快速擴(kuò)增試劑盒（液體基礎(chǔ)型） |
100T |
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WLRN5002 |
RNA恒溫快速擴(kuò)增試劑盒（液體膠體金型） |
100T |
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WLRE5003 |
RNA恒溫快速擴(kuò)增試劑盒（液體熒光型） |
100T
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Cas酶系列
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貨號 |
包裝規(guī)格 |
中文名稱 |
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32108-01 |
100 pmoL |
LbCas12a (Cpf1) |
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32108-03 |
1,000 pmoL |
LbCas12a (Cpf1) |
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32117-01 |
100 pmoL |
LwaCas13a (C2c2) |
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32117-03 |
1,000 pmoL |
LwaCas13a (C2c2) |
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32118-01 |
100 pmoL |
AapCas12b (C2c1) |
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32118-03 |
1,000 pmoL |
AapCas12b (C2c1) |
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32119-01 |
100 pmoL |
Un1Cas12f1 (Cas14a1) |
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32119-03 |
1,000 pmoL |
Un1Cas12f1 (Cas14a1) |
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32104-01 |
100 pmoL |
AsCas12a (Cpf1) |
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32104-03 |
1,000 pmoL |
AsCas12a (Cpf1) |
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32116-01 |
100 pmoL |
AacCas12b (C2c1) |
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32116-03 |
1,000 pmoL |
AacCas12b (C2c1) |
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32106-01 |
100 pmoL |
FnCas12a (Cpf1) |
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32106-03 |
1,000 pmoL |
FnCas12a (Cpf1) |
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32110-01 |
100 pmoL |
Lb5Cas12a (Cpf1) |
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32110-03 |
1,000 pmoL |
Lb5Cas12a (Cpf1) |
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32101-01 |
100 pmoL |
SpCas9 |
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32101-03 |
1,000 pmoL |
SpCas9 |
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32102-01 |
100 pmoL |
Sp-dCas9 |
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32102-03 |
1,000 pmoL |
Sp-dCas9 |
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32120-01 |
100 pmoL |
Sp-nCas9（H840A） |
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32120-03 |
1,000 pmoL |
Sp-nCas9（H840A） |